Тонкости проведения полимеразной цепной реакции на выявление гепатита С

Полимеразная цепная реакция, или ПЦР, – это метод определения РНК и ДНК вируса в различных биологических образцах. Он был открыт более 30 лет назад американским исследователем Кэри Мюллисом. За эту разработку ученый получил Нобелевскую премию по химии. Сегодня ПЦР – золотой стандарт диагностики, который применяется при исследовании наследственных, инфекционных, онкологических заболеваний. ПЦР на гепатит С – самый надежный метод обнаружения вируса начиная с первой недели после инфицирования.

Что такое анализ ПЦР

Полимеразная цепная реакция – это технология, основанная на умножении количества ДНК вирусов в биоматериале. Для лаборатории берется мазок, соскоб, моча, сперма, кровь. Далее производится многократное клонирование содержащегося в ней генетического материала. За 20-35 таких циклов можно получить материал, достаточный для того, чтобы сравнить его с образцами, соответствующими вирусам, бактериям, грибам и т.д. И если по исследуемому пункту обнаружится совпадение, реакция считается положительной.

По результатам ПЦР можно судить не только о наличии вирусной частицы в организме, о том, к какому генотипу она принадлежит, а также о концентрации возбудителя.

ПЦР на выявление гепатита С играет огромную роль. Этот вирус быстро мутирует, обходит иммунные барьеры, не вызывает классических симптомов инфицирования. Но многих его последствий можно избежать, если обнаружить угрозу на ранней стадии.

Врач
ПЦР — метод молекулярного анализа, который позволяет обнаружить генетический материал возбудителя уже на первой неделе после инфицирования.

Анализ крови на гепатит С проводится в лаборатории медицинского учреждения или лицензированного предприятия. Это довольно дорогое исследование, кроме того, нет необходимости назначать его всем подряд в целях профилактики. Но есть ряд показаний, при которых ПЦР играет ключевую роль:

  • незащищенный половой контакт с больным;
  • донорство, использование нестерильных шприцев и игл для татуажа, бритвенных и маникюрных принадлежностей, другие формы контакта с кровью зараженного;
  • цирроз печени;
  • положительный ИФА на гепатит;
  • диагностированный гепатит В.

Кровь на ПЦР сдается утром на голодный желудок. Накануне не курите перед сном и не употребляйте алкоголь. Откажитесь от жареной и острой пищи, дайте отдых мышцам. Этих мер вполне достаточно для получения достоверных данных.

Разновидности ПЦР-диагностики гепатита С

Есть около 15 методик ПЦР. Но все это узкоспециализированные, иногда экспериментальные исследования. В медицинской практике речь идет о трех исследованиях – качественный, количественный методы ПЦР гепатита С и генотипирование. Все они эффективны, но позволяют судить о разных аспектах заболевания.

Качественный

ПЦР качественный дает всего два ответа: наличие или отсутствие вируса. Если РНК гепатовируса содержится в достаточном количестве, чтобы преодолеть порог чувствительности теста, то реакция даст положительный результат, и лаборатория выдаст вердикт «обнаружено». При отсутствии патогена или его незначительных концентрациях, анализ ПЦР на гепатит выдаст результат «не обнаружено», но тогда будет сложно судить о заражении гепатитом.

Если подозрения серьезны, а тест «чист», можно провести особо чувствительное качественное исследование – ПЦР ультра. Это гибридно-флуоресцентный метод, который выделит РНК патогена, даже если его пропустил классический анализ ПЦР. Исследование имеет ряд показаний:

  • первые дни после заражения;
  • скрытый гепатит;
  • проверка отрицательного ПЦР;
  • мониторинг хода терапии.

Количественный

Количественный анализ ПЦР при гепатите С позволяет определить вирусную нагрузку. Этот параметр означает концентрацию единиц болезнетворного микроорганизма в миллилитре крови, то есть позволяет судить о количестве вируса.

Если вы проходите терапию, то изменение концентрации вируса расскажет о том, эффективно ли лечение. Анализ крови проводится через 1, 3 и 6 месяцев после начала приема препаратов. Через полгода после такого курса инфекционист рекомендует контрольный ПЦР.

Этот же метод определяет степень риска для окружающих, такой параметр еще называют инфекционностью. Чем больше вирусных частиц в крови, тем выше риск заразить тех, с кем контактирует зараженный.

Генотипирование

Медицине известны 11 генотипов гепатита С, в России чаще фигурируют 1, 2 и 3. Исследование с генотипированием поможет уточнить, к какой именно группе принадлежит вирус гепатита.

Генотипирование имеет разные прикладные задачи. Например, оно позволяет определить, какой препарат с большей вероятностью уничтожит вирус, а к какому он окажется устойчив. Разные виды гепатовирусов по-своему поддаются терапии, например, 1 генотип требует продолжительного лечения. Курс длится около года и помогает в 6 случаях из 10. Со 2 и 3 штаммами ситуация обстоит проще – лечение занимает всего полгода, а выздоровление наступает уже у 85% пациентов.

Зная генотип гепатовируса, можно спрогнозировать осложнения. Так при 3 штамме в гепатоцитах накапливается жир, это состояние называют стеатозом, жировым гепатозом или жировой инфильтрацией печени. В худших случаях это может стать началом цирроза печени.

Расшифровка анализа: таблица

Чтобы расшифровать количественный анализ ПЦР на гепатит, нужно сопоставить полученные данные с референсными значениями.

Показатель Вирусная нагрузка Значение
Не обнаружено В пределах нормы Слишком мало вирусных частиц или их полное отсутствие
До 1,8*102 МЕ/мл Крайне низкая Требуется повторить анализ
До 8*105 МЕ/мл Низкая Прогноз благоприятный
От 8*105 МЕ/мл до 8*105 МЕ/мл Средняя Хронический вирусный гепатит
Больше 8*105 МЕ/мл Высокая Кровь пациента крайне заразна для окружающих
Больше 2,4*107МЕ/мл Выше верхнего порога чувствительности теста Требуется переделать анализ с разведением образца крови

Преимущества и недостатки метода

Выявить с помощью ПЦР гепатит С можно с высокой степенью точности. Это единственный способ узнать об инфицировании спустя 5 дней после возможного заражения. Он дает точный результат, когда ИФА еще не эффективен, а до первых симптомов еще очень далеко. Кроме того, анализ помогает отслеживать ситуацию в динамике.

ПЦР почти исключает ошибки, но возможен ложноположительный или ложноотрицательный результат, что говорит об ошибке лаборатории. В случаях загрязнения используемого биоматериала анализ может показать ошибочное наличие вируса. При нарушении правил хранения и транспортировки ДНК инфекции может разрушаться, и тогда тест не покажет наличие вируса у зараженного человека. Поэтому анализ проводится только в хорошо оснащенных лабораториях с применением высококачественных реагентов.

ИФА положительный, а ПЦР отрицательный – что это значит?

Комбинация разных анализов позволяет получить полную картину заболевания, хотя это может ввести в заблуждение неспециалистов. Нередко бывает, что ПЦР на гепатит С отрицательный, а ИФА положительный. Анализы не противоречат друг другу. Напротив, ИФА говорит о том, что пациент перенес острый гепатит и иммунитет среагировал на это – выработал антитела к инфекции. ПЦР показывает, что на момент анализа живые вирусные частицы отсутствовали. Иными словами, вы переболели и выздоровели.

Врач и копилка
Сколько стоит анализ на гепатит С? В зависимости от клиники и сложности осуществления исследования цена процедуры может варьироваться от 400 до 11 000 рублей.

В целом считается, что ИФА обладает меньшей надежностью и дает результаты, сложные в интерпретации. Этот метод используют как скрининговый, но окончательные данные можно получить с помощью ПЦР.

ПЦР – оперативный и достоверный метод диагностики. Вы получите результат в течение нескольких часов или недель. Если он окажется положительным, обратитесь к специалисту, чтобы как можно быстрее начать лечение.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

Adblock detector